PCR, algunos trucos.
En muchas ocasiones la última opción ante una pcr que nos da problemas para amplificar el producto deseado, es la de cambiar de primers, por ejemplo cuando queremos amplificar un producto para clonarlo y producir una proteína.
Aquí os dejo algunos de los trucos más utilizados que pueden ayudar cuando tenemos primers con estructuras secundarias, temperaturas de annealing elevadas…
- Dimetil Sulfóxido (DMSO). Facilita la separación de las hebras de ADN. Es de especial ayuda cuando el producto a amplificar presenta alto contenido de GC, ya que interfiere en el emparejamiento de las bases. Produce un aumento en la eficiencia de la PCR.
- Formamida. Produce una disminución en la temperatura necesaria para el annealing de los primers. También aumenta la eficiencia de la PCR.
- Solución Betaine. Reduce la formación de estructuras secundarias en regiones ricas en GC.
- BSA (Albúmina). Muy útil cuando trata de amplificarse un producto obtenido de una muestra que presente inhibidores de la pcr.
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